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Annexin V 是檢測早期細胞凋亡的最靈敏指標之一。正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜磷脂雙分子層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞質膜內側的磷脂酰絲氨酸發(fā)生外翻，暴露于細胞質膜的外側。Annexin V是一種與磷脂酰絲氨酸有高度親和力的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，因此能夠利用Annexin V與細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸相結合的性質，檢測細胞的早期凋亡。將Annexin V進行綠色熒光(EGFP)標記，以標記了的Annexin V-EGFP作為探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶(PI)是一種核酸染料，它不能透過具備完整細胞膜的正常細胞和早期凋亡細胞，但能夠透過凋亡中晚期的細胞和壞死細胞的細胞膜而將細胞核染色，在特定激發(fā)光條件下呈現紅色。
將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，若橫坐標表示Annexin V信號，縱坐標表示PI信號，則左下象限(Annexin V-/PI-)代表活細胞；右下象限(Annexin V+ /PI-)代表早期凋亡細胞；右上象限(Annexin V+ /PI+)代表凋亡晚期細胞和壞死細胞；左上象限(Annexin V-/PI+)被認為是許可范圍內的檢測誤差。
Jurkat T 淋巴瘤細胞經 Camptothecin 誘導發(fā)生凋亡后的流式細胞儀檢測結果
1 Dai Y J, He S Y, Hu F, et al. Bone marrow infiltrated natural killer cells predicted the anti-leukemia activity of MCL1 or BCL2 inhibitors in acute myeloid leukemia[J]. Molecular Cancer, 2021.(IF 27.40)
