產(chǎn)品詳情介紹
本產(chǎn)品低溫UDG (Uracil-DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA糖基化酶) 是來源于嗜冷海洋細(xì)菌經(jīng)改造后后于大腸桿菌(Escherichia coli) 表達純化的重組蛋白。UDG酶能有效地水解單鏈或雙鏈 DNA 中的尿嘧啶 (dU) 堿基和脫氧核糖之間的N-糖苷鍵發(fā)生水解，從而釋放游離尿嘧啶，產(chǎn)生缺嘧啶位點，主要用于消除含dU的PCR產(chǎn)物帶來的氣溶膠污染。本產(chǎn)品在高溫或高pH下，極易水解斷裂。與常規(guī)UDG酶相比，本產(chǎn)品可在較低溫度 (20℃)下起作用，即常溫配制qPCR或者qRT-PCR反應(yīng)體系時就能對污染的含dU的模板進行降解。該酶對反轉(zhuǎn)錄時產(chǎn)生的含dU的cDNA(DNA/RNA雜交形式) 沒有降解功能。本產(chǎn)品在大多數(shù)PCR反應(yīng)緩沖液中都有很高的活性，適用于PCR/qPCR、RT-PCR/qRT-PCR、LAMP/RT-LAMP。
反應(yīng)速度快
以新型冠狀病毒反轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 為模板，dUTP 代替 dTTP 進行 PCR 擴增，擴增產(chǎn)物進行10-9、10-8、10-7、10-6 倍稀釋，加入 TransGen UDG消化， qPCR 檢測消化效果，結(jié)果顯示， TransGen 產(chǎn)品反應(yīng)速度快，1分鐘即可對污染的含 dU 的模板進行降解。
消化能力強
以非洲豬瘟病毒(ASFV)、豬偽狂犬病毒(PRV)擴增的含U-PCR產(chǎn)物和新型冠狀病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)反轉(zhuǎn)錄后擴增的含U-PCR產(chǎn)物為模板，加入0 UDG、TransGen UDG (2.5 U/mL)、Company N UDG (2.5 U/mL)消化，qPCR 檢測消化效果。結(jié)果顯示，TransGen UDG消化能力強，能更有效去除體系中的非模板來源的DNA污染。(ΔCq表示 TransGen UDG、Company N UDG 與 0 UDG三種反應(yīng)體系的 Cq差值，差值越大，表示UDG消化能力越強）
PCR反應(yīng)抑制低
以非洲豬瘟病毒 DNA 為模板，采用 0 UDG、TransGen UDG (2.5 U/mL)、Company N UDG (2.5 U/mL)三種體系進行 qPCR ，結(jié)果表明，TransGen UDG與Company N UDG在工作濃度下均無明顯的PCR抑制現(xiàn)象。
新型冠狀病毒
以高濃度 (26500 copies/mL)和低濃度 (200 copies /mL)的新冠假病毒RNA為模板，采用 0 UDG、TransGen UDG (2.5 U/mL)、Company N UDG (2.5 U/mL)三種體系進行 qRT-PCR ，結(jié)果表明，TransGen UDG與Company N UDG在工作濃度下均無明顯的PCR抑制現(xiàn)象。
以新冠假病毒RNA為模板，采用 40 U/mL和 80 U/mL的 TransGen UDG兩種體系進行 qRT-PCR ，結(jié)果表明，TransGen UDG 濃度達到 80 U/mL時 (相當(dāng)于50 μL體系加入了4 Units UDG)對整個PCR反應(yīng)也無明顯抑制。
對含U的cDNA擴增無影響
分別用不含 U 和含 U 的 cDNA 為模板，在反應(yīng)體系中分別加入0 UDG、TransGen UDG (2.5 U/mL)、Company N UDG (2.5 U/mL)，qPCR 檢測 UDG 對含 U 的 cDNA 擴增的影響，結(jié)果顯示， TransGen 低溫 UDG 對含U的cDNA擴增無影響。
