核仁是真核細(xì)胞間期核中最明顯的結(jié)構(gòu)。它位于細(xì)胞核中。為生殖做出了貢獻(xiàn)，并聚集著核糖體。曾經(jīng)集合的核糖體從細(xì)胞核中出來，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。對(duì)核仁結(jié)構(gòu)、動(dòng)態(tài)和功能的研究,不僅為早期細(xì)胞學(xué)家所密切注意,而且在20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)核仁的重要功能以后,也一直受到各相關(guān)領(lǐng)域研究者的高度重視。

 2021年7月30日，中國科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心（生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所）陳玲玲研究組和劉珈泉研究組在《Science》發(fā)表了合作研究成果“l(fā)ncRNA SLERT controls phase separation of FC/DFCs to facilitate Pol I transcription”，并獲同期Perspectives專評(píng)。該研究首次揭示了長非編碼RNA SLERT以RNA分子伴侶機(jī)制改變互作核仁蛋白DDX21構(gòu)象進(jìn)而影響FC/DFC區(qū)域的大小和流動(dòng)性，維持RNA聚合酶I高效轉(zhuǎn)錄生成核糖體RNA。

（A）左上：體外相分離實(shí)驗(yàn)中，纖維狀DDX21的形成隨蛋白濃度降低而減弱；左下：在不同的實(shí)驗(yàn)體系中，不同濃度的DDX21蛋白呈現(xiàn)不同的分子狀態(tài)，SLERT可以增加DDX21蛋白的流動(dòng)性；右：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外重構(gòu)實(shí)驗(yàn)中，SLERT通過結(jié)合DDX21增加FC/DFC轉(zhuǎn)錄單元的大小和流動(dòng)性。

（B）DDX21分子抱團(tuán)聚集在核仁DFC區(qū)域的外側(cè)，并且限制FC/DFC區(qū)域的大小和流動(dòng)性。SLERT調(diào)控DDX21的構(gòu)象由開放轉(zhuǎn)為閉合，DDX21分子呈現(xiàn)低聚的疏松狀態(tài)，為Pol I的高效轉(zhuǎn)錄提供合適的空間環(huán)境。Pol I轉(zhuǎn)錄發(fā)生在FC和DFC的交界處，DDX21卷曲纏繞rDNA阻止Pol I轉(zhuǎn)錄復(fù)合物在rDNA的占位。SLERT調(diào)控DDX21的構(gòu)象和流動(dòng)性抑制DDX21對(duì)rDNA的纏繞從而促進(jìn)Pol I轉(zhuǎn)錄。

 該工作首次發(fā)現(xiàn)SLERT以RNA分子伴侶機(jī)制調(diào)控蛋白質(zhì)的構(gòu)象和多聚狀態(tài)并且觀察到單分子水平下蛋白質(zhì)微觀相分離的功能特征和調(diào)控機(jī)制。蛋白質(zhì)的多聚狀態(tài)與其流動(dòng)性，分子間相互作用以及功能發(fā)揮直接相關(guān)，RNA分子伴侶通過跨越數(shù)量級(jí)調(diào)控核仁蛋白質(zhì)相分離特性維持細(xì)胞核仁正常的形態(tài)功能，對(duì)lncRNA領(lǐng)域和相分離領(lǐng)域的深入研究具有重大意義。

 全式金無縫拼接系列產(chǎn)品pEASY^?-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit(CU201)與感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品Transetta(DE3) Chemically Competent Cell(CD801)攜手助力該項(xiàng)研究。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1、pEASY^?-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit(CU201)

 利用特殊的重組酶和同源重組的原理，可以將任意方法線性化后的載體和與其兩端具有15-25 bp 重疊區(qū)域的PCR 片段定向重組，可實(shí)現(xiàn)1-5 個(gè)片段的高效無縫拼接。

 - 快速：僅需要15分鐘反應(yīng)時(shí)間。

 - 簡單：不受片段酶切位點(diǎn)的影響，無需對(duì)片段酶切。

 - 高效：陽性率達(dá)95%以上。

 - 無縫：不引入額外的序列。

單片段高效連接實(shí)驗(yàn)

 1 kb PCR 片段插入pUC19 載體后，PCR 鑒定插入效果。結(jié)果顯示，插入片段的陽性率達(dá)100%。

單片段插入后，挑取60 個(gè)單克隆菌落進(jìn)行PCR 鑒定

M: Trans2K^? Plus II DNA Marker

不同長度單片段連接實(shí)驗(yàn)

 不同長度PCR片段（50 bp、2 kb、5 kb、8 kb）分別插入PG載體后，分別用內(nèi)切酶酶切鑒定插入效果。結(jié)果顯示，不同長度的PCR片段均正確插入PG載體。

單片段插入后酶切

不同長度多片段連接實(shí)驗(yàn)

 不同長度PCR片段(600 bp，900 bp，1200 bp，1500 bp，1800 bp，片段兩端設(shè)計(jì)Nde I酶切位點(diǎn))，混合后插入pUC19載體后，Nde I酶切鑒定插入效果。結(jié)果顯示，不同長度的PCR片段均正確插入pUC19載體。

多片段插入后酶切

2、Transetta(DE3) Chemically Competent Cell(CD801)

 Transetta（DE3）是采用進(jìn)口菌株，特殊工藝制作，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。細(xì)胞具有氯霉素(Cam^r)抗性。使用pUC19質(zhì)粒DNA檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10⁷ cfu/μg DNA。使用Control Plasmid I (Amp⁺)用于檢測細(xì)胞是否具有表達(dá)功能，表達(dá)蛋白大小為25 kDa。

特點(diǎn)

 該菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子（AUA， AGG， AGA，CUA， CCC， GGA）對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：

全式金產(chǎn)品一次次登上CNS，是對(duì)全式金人的鼓舞與認(rèn)可。未來我們將繼續(xù)秉持“品質(zhì)高于一切，精品服務(wù)科研”的理念，為客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品，助力科研。