RNA導(dǎo)向的DNA甲基化(RdDM)途徑是高等植物基因組甲基化的重要途徑。在該途徑中,植物獨有的兩個RNA聚合酶(Pol IV和Pol V)發(fā)揮了核心作用。Pol IV和Pol V作為真核生物的第四個和第五個多亞基RNA聚合酶,其基因轉(zhuǎn)錄區(qū)域、轉(zhuǎn)錄起始、延伸和終止機(jī)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控方式均和Pol I、 Pol II和Pol III有較大區(qū)別。Pol IV轉(zhuǎn)錄的獨特之處在于, Pol IV能夠與RDR2形成復(fù)合物,直接以雙鏈的基因組DNA為模板催化dsRNA的合成。雖然植物Pol IV和Pol V于2005年被發(fā)現(xiàn),然而其三維結(jié)構(gòu)仍然未被報導(dǎo),大大阻礙了Pol IV和Pol V的進(jìn)一步深入研究。
近期,中國科學(xué)院分子植物科學(xué)卓越創(chuàng)新中心張余研究團(tuán)隊和王佳偉研究團(tuán)隊以及浙江大學(xué)馮鈺團(tuán)隊在《Science》發(fā)表了合作研究成果“Pol IV and RDR2: A two-RNA-polymerase machine that produces double-stranded RNA”. 該研究解析了Pol IV-RDR2蛋白復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu),并提出了Pol IV-RDR2以雙鏈DNA為模板合成雙鏈RNA的獨特分子機(jī)制。
Pol IV-RDR2的三維結(jié)構(gòu)以及二者高效合作合成雙鏈RNA的機(jī)制
這項工作首次揭示了真核生物第四個多亞基RNA聚合酶的三維構(gòu)造,闡明了兩種RNA聚合酶Pol IV和RDR2協(xié)作轉(zhuǎn)錄的獨特分子機(jī)制,回答了RdDM途徑中雙鏈RNA如何合成的科學(xué)問題。這一研究結(jié)果拓展了真核生物RNA聚合酶結(jié)構(gòu)和功能的多樣性,加深了我們對植物表觀遺傳機(jī)制的理解。
全式金點突變系列產(chǎn)品Fast Mutagenesis System (FM111)助力該項研究。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
1、由于采用部分重疊引物 (均含突變點) 設(shè)計,使PCR呈指數(shù)擴(kuò)增, 擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳可見,擴(kuò)增產(chǎn)物為環(huán)狀,易于轉(zhuǎn)化;
2、使用2×TransStart? FastPfu Fly PCR SuperMix擴(kuò)增,縮短了擴(kuò)增時間,同時提高了擴(kuò)增的保真性;
3、利用體外限制性內(nèi)切酶和體內(nèi)感受態(tài)細(xì)胞降解甲基化質(zhì)粒模板,突變效率更高,對照突變效率高達(dá)90%。
全式金產(chǎn)品一次次登上CNS,是對全式金人的鼓舞與認(rèn)可。未來我們將繼續(xù)秉承“品質(zhì)高于一切,精品服務(wù)客戶”的理念,堅持創(chuàng)新與自主研發(fā),提供高品質(zhì)的產(chǎn)品。