Q：條帶模糊的原因？

A：

? 電壓過高或電泳時(shí)間過長(zhǎng)，產(chǎn)熱過多導(dǎo)致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產(chǎn)品使用說明書。

? 電泳緩沖液陳舊，建議使用新鮮的電泳緩沖液，為了獲得理想的結(jié)果建議在使用前預(yù)冷緩沖液。

? 分離膠的濃度偏低，建議使用合適的膠濃度。

? 凝膠放置時(shí)間過長(zhǎng)，建議使用新配制的凝膠電泳。

Q： 為什么有時(shí)候帶型不整齊？

A：

? 建議點(diǎn)樣時(shí)將蛋白Marker放在泳道中間。如在凝膠兩側(cè)泳道，由于邊緣效應(yīng)、離子強(qiáng)度不均等原因，均會(huì)導(dǎo)致帶型變寬或彎曲。

? 凝膠配制不勻，凝膠內(nèi)存有氣泡，或點(diǎn)樣孔中有細(xì)碎的殘膠。

Q：電泳時(shí)蛋白Marker分離不開？

A：大多為膠濃度不合適，要在推薦的凝膠濃度范圍內(nèi)使用。此外，比較陳舊的凝膠和緩沖液也會(huì)造成電泳效果不好。

Q：預(yù)染Marker電泳后清晰，但是轉(zhuǎn)膜后顏色很淺？

A：

? 轉(zhuǎn)膜時(shí)一定要將膠和膜壓緊，否則條帶會(huì)在轉(zhuǎn)膜過程中丟失或變淺。

? 轉(zhuǎn)膜條件不適合，建議200 mA、2小時(shí)，或100 mA過夜轉(zhuǎn)膜。

Q：轉(zhuǎn)膜時(shí)甲醇的濃度是多少，會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)膜造成什么影響？

A：甲醇的濃度一般推薦為15%，甲醇濃度太高易造成蛋白穿膜，轉(zhuǎn)移到濾紙上。

Q：發(fā)光液配制需要避光嗎？

A：不需要避光，但是要現(xiàn)配現(xiàn)用，配制后馬上進(jìn)入暗室進(jìn)行下面的操作。

Q：發(fā)光液的有效曝光時(shí)間多長(zhǎng)？

A：發(fā)光液在2小時(shí)以內(nèi)均可以曝光，但是前30分鐘曝光能力較強(qiáng)，隨著時(shí)間的推移可適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間來調(diào)節(jié)曝光強(qiáng)度。

Q：曝光后X光片背景很黑是什么原因？

A：背景很黑可能是曝光時(shí)間太長(zhǎng)或者顯影時(shí)間過長(zhǎng)造成的。

Q：Western Marker 曝光后雜帶很多是什么原因？

A：Marker上樣量過多或曝光時(shí)間過長(zhǎng)，可適當(dāng)減少上樣量或曝光時(shí)間。此外，二抗的濃度過高或特異性和純度不高，也會(huì)造成雜帶較多的結(jié)果。